Conseguita la maturità linguistica ad Agrigento, sua città natale, si trasferisce a Roma, dove ottiene la laurea in Lettere Moderne e Discipline dello Spettacolo presso l’Università La Sapienza. Inoltre studia recitazione e dizione presso il Conservatorio Teatrale “La Scaletta”, fondato e diretto da Giovanni B. Diotiaiuti.
Nel 2000 si reca negli Stati Uniti, dove perfeziona la lingua inglese e studia recitazione. Tornato in Italia, riprende, dopo piccole altre precedenti esperienze, a lavorare in teatro, questa volta, sotto la direzione di Arnaldo Ninchi e Giuseppe Patroni Griffi.
Dopo l’esordio televisivo nella serie tv Incantesimo (2001), interpreta il ruolo del carnale e violento Duccio nella serie Il bello delle donne (2003).
Diventa molto popolare con la serie TV di Canale 5 CentoVetrine, dove, dall’ ottobre del 2004 al 2008, interpreta il protagonista, Marco della Rocca, eroe romantico e tormentato, amatissimo dai telespettatori. Riceve nel 2005 e poi ancora nel 2006 la Telegrolla d’Oro, come miglior attore.
L’esordio al cinema risale al 2004, anno dell’uscita nelle sale del film Il siero della vanità, regia di Alex Infascelli. Alterna il lavoro televisivo e cinematografico con quello teatrale. Dopo aver recitato in opere di Luigi Pirandello, William Shakespeare e Arthur Miller, nel dicembre del 2005 porta sulle scene, al Teatro della Posta Vecchia di Agrigento, Alessandro Mario recita Pirandello, due monologhi tratti da Il fu Mattia Pascal e da Non si sa come.
Nel 2012 torna al cinema, interpretando in lingua inglese il ruolo di Bartolomeo Vanzetti nel film di produzione americana No God, No Master, regia di Terry Green, accanto al candidato all’Oscar David Strathairn. All’uscita del film negli Usa, nell’ Aprile del 2014, su The Hollywood Reporter Franck Scheck scrive “…No God, No Master ricrea il suo periodo storico con vivido realismo” e Chris Klimek su The Dissolve scrive: “Alessandro Mario è un irresistibile Vanzetti”.
Nel 2013 è stato protagonista, insieme ad Aída Yéspica, del thriller ‘Undersense’ diretto dalla giovane Simona Ilaria di Michele e selezionato all’International Film Festival of Cinematic Arts di Los Angeles.
Nel 2014, in collaborazione con il festival ’Il Dio di mio padre’, porta in scena ‘Viaggio con John Fante’, uno spettacolo in parole e musica, interamente dedicato all’opera dello scrittore italoamericano.
Nella stagione teatrale 2014-2015 è in cartellone al Piccolo Eliseo di Roma, protagonista della commedia romantica ‘Vi presento Jack’, sul tema dell’uomo che arriva dall’aldilà, già ispirazione dell’opera teatrale degli anni venti ‘La Morte in vacanza’.
Nel giugno del 2014 l’attore tornerà sul set di Centovetrine, per interpretare ancora una volta Marco Della Rocca, sex symbol storico della serie che ha reso il suo volto famoso. Gli episodi della sua entrata in scena andranno in onda nel 2015.